Uit de wereld van de bio-ingenieurs, denk ik.
- Bereid 130 ul vers 3X reducerende SDS laadbuffer door het toevoegen van 4 ul van 1.25m DTT.
- Voeg 12,5 ul van de voorbereide 3x reducerende SDS laadbuffer aan elk monster.
- Sluit de buizen met nieuwe caps en tik de buizen om te mengen.
- Incubeer de buizen in een thermocycler bij 94 ° C gedurende 5 minuten en daarna afkoelen tot 4 ° C.
- Belasting 30 pi van elk monster en 10 ul van het eiwit marker op een 10-20% Tris-Glycine gel. Sla de rest van de steekproef voor deel 3.1. Belasting 10μl van ColorPlus Prestained Protein Marker.
- Electrophorese de gel op 130 volt bij kamertemperatuur totdat de kleurstof voorkant is de buurt van de onderkant van de gel.
- Wanneer de gel is voltooid, verwijdert u de gel uit de cast en plaats deze in een klein plastic doosje met genoeg Coomasie blauwe vlek om de gel te dekken.
- Vlekken op de gel gedurende 1 uur onder zacht schudden.
- Was de gel drie keer voor 30 minuten in 50 ml van destain oplossing.
- Noteer de beelden met behulp van een wit licht transilluminator of scanner. Als alternatief kan de gel worden gedroogd tussen de bladen van cellofaan in een frame.
Leuven, Tervuursestraat, 1 april 2015, Foto Hendrik Elie Vanden Abeele